Awọn ọja
Ohun elo Wiwa Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR fun 2019-nCoV
O ti ṣe yẹ lilo
A lo ohun elo yii fun wiwa agbara ti coronavirus tuntun (2019-nCoV) ni lilo awọn swabs ọfun, awọn swabs nasopharyngeal, omi lavage bronchoalveolar, sputum. Abajade wiwa ọja yii jẹ fun itọkasi ile-iwosan nikan, ati pe ko yẹ ki o lo bi nikan ẹri fun iwadii aisan ati itọju ile-iwosan. A ṣe iṣeduro igbelewọn okeerẹ ti ipo naa ni idapo pẹlu awọn ifarahan ile-iwosan alaisan ati awọn idanwo yàrá miiran.
Ilana ayewo
Ohun elo naa da lori imọ-ẹrọ RT- PCR-igbesẹ kan.Ni otitọ, coronavirus tuntun 2019 (2019-nCoV) ORF1ab ati awọn jiini N ni a yan bi awọn agbegbe ibi-afẹde imudara.Awọn alakoko kan pato ati awọn iwadii fluorescent (Awọn iwadii jiini N jẹ aami pẹlu FAM ati awọn iwadii ORF1ab jẹ aami pẹlu HEX) jẹ apẹrẹ lati rii 2019 iru coronavirus RNA tuntun ninu awọn ayẹwo.Ohun elo naa tun pẹlu eto wiwa iṣakoso inu inu inu (iwadii apilẹṣẹ iṣakoso ti inu ti a samisi pẹlu CY5) lati ṣe atẹle ilana ti gbigba ayẹwo, RNA ati imudara PCR, nitorinaa idinku awọn abajade odi eke.
Awọn paati akọkọ
| Awọn eroja | Iwọn didun(48T/Apo) |
| RT-PCR idahun ojutu | 96µl |
| nCOV alakoko TaqMan probemixture (ORF1ab, N Gene, RnaseP Gene) | 864µl |
| Iṣakoso odi | 1500µl |
| NCOV Contro Rere (l ORF1ab N Gene) | 1500µl |
Awọn reagents ti ara: isediwon RNA tabi awọn reagents ìwẹnumọ.Iṣakoso odi/idaniloju: Iṣakoso rere jẹ RNA ti o ni ajẹku ibi-afẹde, lakoko ti iṣakoso odi jẹ omi ti ko ni acid nucleic.Lakoko lilo, wọn yẹ ki o kopa ninu isediwon ati pe o yẹ ki o gbero akoran.Wọn yẹ ki o wa ni ọwọ ati sọnu ni ibamu pẹlu awọn ilana ti o yẹ.
Jiini itọkasi inu jẹ jiini RnaseP eniyan.
Awọn ipo ipamọ ati ọjọ ipari
-20 ± 5 ℃, yago fun didi tun ati thawing diẹ sii ju awọn akoko 5, wulo fun awọn oṣu 6.
Ohun elo to wulo
Pẹlu FAM / HEX / CY5 ati ohun elo PCR fluorescent olona-ikanni miiran.
Awọn ibeere apẹrẹ
1.Awọn iru apẹẹrẹ ti o wulo: awọn swabs ọfun, awọn swabs nasopharyngeal, omi lavage bronchoalveolar, sputum.
2.Specimen gbigba (ilana aseptic)
swab Pharyngeal: Mu awọn tonsils ati odi pharyngeal ti o tẹle pẹlu awọn swabs meji ni akoko kanna, lẹhinna fi ori swab sinu tube idanwo ti o ni ojutu ayẹwo
Sputum: Lẹhin ti alaisan ba ni Ikọaláìdúró jinlẹ, gba sputum ikọ naa sinu tube idanwo fila dabaru ti o ni ojutu iṣapẹẹrẹ;omi lavage bronchoalveolar: Iṣapẹẹrẹ nipasẹ awọn alamọdaju iṣoogun.3.Storage ati gbigbe ti awọn ayẹwo
Awọn apẹẹrẹ fun ipinya ọlọjẹ ati idanwo RNA yẹ ki o ni idanwo ni kete bi o ti ṣee.Awọn apẹẹrẹ ti o le rii laarin awọn wakati 24 le wa ni ipamọ ni 4℃;awọn ti a ko le rii laarin 24
Awọn wakati yẹ ki o wa ni ipamọ ni -70 ℃ tabi isalẹ (ti ko ba si ipo ipamọ ti -70 ℃, wọn yẹ ki o jẹ
fun igba diẹ ti o ti fipamọ ni -20 ℃ firiji).Awọn apẹẹrẹ yẹ ki o yago fun didi leralera ati thawing lakoko gbigbe.Awọn apẹẹrẹ yẹ ki o firanṣẹ si yàrá-yàrá ni kete bi o ti ṣee lẹhin gbigba.Ti awọn ayẹwo ba nilo lati gbe lori awọn ijinna pipẹ, a ṣe iṣeduro ibi ipamọ yinyin gbigbẹ.
Awọn ọna Idanwo
1 Iṣayẹwo ayẹwo ati isediwon RNA (agbegbe iṣelọpọ ayẹwo)
O ti wa ni niyanju lati mu 200μl ti omi ayẹwo fun RNA isediwon.Fun awọn igbesẹ isediwon ti o jọmọ, tọka si awọn ilana ti awọn ohun elo isediwon RNA ti iṣowo.Mejeji awọn odi ati odi
awọn idari ninu kit yii ni ipa ninu isediwon.
2 PCR reagent igbaradi (agbegbe igbaradi reagent)
2.1 Yọ gbogbo awọn eroja kuro lati inu ohun elo naa kit ati ki o dapọ ni iwọn otutu yara.Centrifuge ni 8,000 rpm fun iṣẹju diẹ ṣaaju lilo;ṣe iṣiro iye ti a beere fun awọn reagents, ati pe a ti pese eto ifaseyin bi o ṣe han ninu tabili atẹle:
| Awọn eroja | N sìn (ètò 25µl) |
| nCOV alakoko TaqMan probemixture | 18µl × N |
| RT-PCR idahun ojutu | 2µl × N |
| * N = nọmba ti awọn ayẹwo idanwo + 1 (Iṣakoso odi) + 1 (nCOViṣakoso rere) | |
2.2 Lẹhin ti o dapọ awọn paati daradara, centrifuge fun igba diẹ lati jẹ ki gbogbo omi ti o wa lori ogiri tube ṣubu si isalẹ tube naa, lẹhinna fi eto imudara 20 µl sinu tube PCR.
3 Iṣapẹẹrẹ (agbegbe igbaradi apẹẹrẹ)
Ṣafikun 5μl ti odi ati awọn idari rere lẹhin isediwon.RNA ti ayẹwo lati ṣe idanwo ni a ṣafikun si tube ifura PCR.
Fi tube naa ni wiwọ ati centrifuge ni 8,000 rpm fun iṣẹju diẹ ṣaaju gbigbe si agbegbe wiwa ampilifaya.
Imudara PCR 4 (agbegbe wiwa ti o pọ si)
4.1 Gbe tube ifaseyin sinu sẹẹli ayẹwo ti ohun elo, ki o ṣeto awọn aye bi atẹle:
| ipele | Yiyipo nọmba | Iwọn otutu(°C) | Aago | gbigbaojula |
| Yipadatranscription | 1 | 42 | 10 min | - |
| Pre-denatution | 1 | 95 | 1 min | - |
| Yiyipo | 45 | 95 | 15s | - |
| 60 | 30-orundun | gbigba data |
Aṣayan ikanni wiwa ohun elo: Yan ikanni FAM, HEX, CY5 fun ifihan agbara fluorescence.Fun itọkasi Fuluorisenti KO, jọwọ ma ṣe yan ROX.
Itupalẹ esi 5 (Jọwọ tọka si awọn ilana idanwo ti ohun elo kọọkan fun eto)
Lẹhin ti awọn lenu, fi awọn esi.Lẹhin itupalẹ, ṣatunṣe iye ibẹrẹ, iye ipari, ati iye ala ti ipilẹṣẹ ni ibamu si aworan naa (olumulo le ṣatunṣe ni ibamu si ipo gangan, iye ibẹrẹ le ṣeto si 3 ~ 15, iye ipari le ṣeto si 5 ~ 20, tolesese) ni aworan logarithmic Ni iloro ti window, laini ila wa ni ipele logarithmic, ati iwọn imudara ti iṣakoso odi jẹ laini taara tabi ni isalẹ laini iloro).
6 Iṣakoso iwọn (Iṣakoso ilana kan wa ninu idanwo naa) Iṣakoso odi: Ko si ohun ti tẹ imudara ti o han gbangba fun FAM, HEX, awọn ikanni wiwa CY5
COV iṣakoso rere: iṣipopada imudara ti o han gbangba ti FAM ati awọn ikanni wiwa HEX, iye Ct≤32, ṣugbọn ko si igbi imudara ti ikanni CY5;
Awọn ibeere loke gbọdọ wa ni pade ni nigbakannaa ni kanna ṣàdánwò;bibẹẹkọ, idanwo naa ko wulo ati pe o nilo lati tun ṣe.
7 Ipinnu awọn abajade.
7.1 Ti ko ba si ohun ti tẹ ampilifaya tabi iye Ct> 40 ninu awọn ikanni FAM ati HEX ti ayẹwo idanwo, ati pe ohun ti tẹ imudara wa ni ikanni CY5, o le ṣe idajọ pe ko si 2019 coronavirus tuntun (2019-nCoV) RNA ninu apẹẹrẹ;
.2 Ti ayẹwo idanwo ba ni awọn iyipo imudara ti o han gbangba ni awọn ikanni FAM ati HEX, ati pe iye Ct jẹ ≤40, o le ṣe idajọ pe ayẹwo jẹ rere fun 2019 coronavirus tuntun (2019-nCoV).
7.3 Ti ayẹwo idanwo naa ba ni iyipo imudara ti o han gbangba nikan ni ikanni kan ti FAM tabi HEX, ati pe iye Ct jẹ ≤40, ati pe ko si ohun ti a fi agbara mu ni ikanni miiran, awọn abajade nilo lati tun idanwo.Ti awọn abajade idanwo ba wa ni ibamu, ayẹwo le ṣe idajọ lati jẹ rere fun tuntun
coronavirus 2019 (2019-nCoV).Ti abajade idanwo naa jẹ odi, o le ṣe idajọ pe ayẹwo jẹ odi fun coronavirus tuntun 2019 (2019-nCoV).
Iye idajọ to dara
Ọna ti tẹ ROC ni a lo lati pinnu iye itọkasi CT ti kit ati iye itọkasi iṣakoso inu jẹ 40.
Itumọ awọn abajade idanwo
1.Each ṣàdánwò yẹ ki o wa ni idanwo fun odi ati rere idari.Awọn abajade idanwo le pinnu nikan nigbati awọn idari ba pade awọn ibeere iṣakoso didara
2.Nigbati awọn ikanni wiwa FAM ati HEX jẹ rere, abajade lati ikanni CY5 (ikanni iṣakoso inu) le jẹ odi nitori idije eto.
3.Nigbati abajade iṣakoso inu inu jẹ odi, ti o ba jẹ pe FAM ti idanwo tube ati awọn ikanni wiwa HEX tun jẹ odi, , o tumọ si pe eto naa jẹ alaabo tabi iṣẹ naa jẹ aṣiṣe, t idanwo naa ko wulo.Nitorina, awọn ayẹwo nilo lati tun ṣe ayẹwo.
